高压蒸汽灭菌

湿热灭菌方法的一种。是微生物培养中最重要的灭菌方法。这种灭菌方法是基于水在煮沸时所形成的蒸汽不能扩散到外面去,网上新金沙:而聚集在密封的容器中,在密闭的情况下,随着水的煮沸,蒸汽压力升高,温度也相应增高。高压蒸汽是最有效的灭菌法,能迅速地达到完全彻底
灭菌。一般在15磅/英寸2
压力下(121.6℃),15~30分钟,所有微生物包括芽孢在内都可杀死。它适用于对一般培养基和玻璃器皿的灭菌。 
  进行高压蒸汽灭菌的容器是高压蒸汽灭菌锅。高压蒸汽灭菌锅是一个能耐压又可以密闭的金属锅,有立式与卧式两种。热源可以用电热、煤气、蒸汽等。锅上装有压力表,有的还装有温度计,能及时了解锅内压力及温度。锅上还设有排气口,其作用是在密闭之前,利用蒸汽将锅内的冷空气排净,另外还装有安全活门,如果压力超过一定限度,活门即可自动打开,放出过多的蒸汽。 
高压灭菌的原理是:在密闭的蒸锅内,其中的蒸汽不能外溢,压力不断上升,使水的沸点不断提高,从而锅内温度也随之增加。在0.1MPa的压力下,锅内温度达121℃。在此蒸汽温度下,可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。  
注意:完全排除锅内空气,使锅内全部是水蒸气,灭菌才能彻底。高压灭菌放气有几种不同的做法,但目的都是要排净空气,使锅内均匀升温,保证灭菌彻底。常用方法是:关闭放气阀,通电后,待压力上升到0.05MPa时,打开放气阀,放出空气,待压力表指针归零后,再关闭放气阀。关阀再通电后,压力表上升达到0.1MPa时,开始计时,维持压力0.1~0.15MPa 20分钟。  
到达保压时间后,即可切断电源,在压力降到0.5MPa,可缓慢放出蒸气,应注意不要使压力降低太快,以致引起激烈的减压沸腾,使容器中的液体四溢。当压力降到零后,才能开盖,取出培养基,摆在平台上,以待冷凝。不可久不放气,引起培养基成分变化,以至培养基无法摆斜面 。一旦放置过久,由于锅炉内有负压,盖子打不开,只要将放气阀打开,大气压入,内外压力平衡,盖子便易打开了。  
对高压灭菌后不变质的物品,如无菌水、栽培介质、接种用具,可以延长灭菌时间或提高压力。而培养基要严格遵守保压时间,既要保压彻底,又要防止培养基中的成分变质或效力降低,不能随意延长时间 
高压蒸汽灭菌锅的操作过程与注意事项 
(1)准备。将灭菌锅放在2000瓦电炉上,或放在有足够火力的煤气灶、煤炉上,向锅内加水至水位标记线为止。将准备灭菌的培养基及空玻璃器皿用牛皮纸包好,装入锅内套层中,物品放置不宜过多,过挤,锅内应留出三分之一空间。然后盖严锅盖,采用对角式均匀拧紧锅盖上的螺旋,关闭锅盖上的气阀。 
  (2)加热。点燃热源,开始加热。当锅盖上的压力表达到0.5千克/厘米2
时,打开放气阀,排净锅内冷空气,直到压力表回降到“0”时,关闭气阀,继续加热。当压力表上升到所需压力时(一般为1千克/厘米2
),开始计算灭菌时间。此时应适当关小热源,不断调节热源大小,使压力始终维持在所需数值上,达到保压时间后,停止加热,使灭菌锅内压力自然下降。(3)结束。待压力表降至“0”时,拧松螺旋,半开锅盖,用锅内余热烘干盖纸,10分钟后取出灭菌物品。 
  (4)注意事项。在灭菌过程中,应注意排净锅内冷空气,锅内冷空气如排放不净,会影响灭菌效果,达不到彻底灭菌的目的。由于高压蒸汽灭菌时,要使用温度高达120℃、两个大气压的过热蒸汽,操作时,必须严格按照操作规程操作,否则容易发生意外事故。 
 采用的方法是高压蒸气灭菌。要求在灭菌过程中排出锅内的冷空气,这是为什么呢? 高压蒸气灭菌的原理,是利用一定压力提高水的沸点,使温度超过100℃ ,形成高压高温水蒸汽,迅速穿透细菌细胞壁而使细菌的蛋白质变性以达到灭菌的目的。在使用高压蒸气灭菌时,灭菌锅内的冷空气的排出是否完全,极为重要,因为空气的膨胀压大于水蒸气的膨胀压,所以当水蒸气中含有空气时,含空气蒸气的温度低于饱和水蒸气的温度。灭菌锅内留有不同分量空气时,压力与温度的关系如下表1。 
表1 灭菌锅内留有不同分量空气时,压力与温度的关系

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文章摘要:高压蒸汽灭菌,闻风而起狐群狗党固有,各处室龙生九子休养。

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